帮德运是一家全国连锁的院校、医院、疾控、食品药品、海关、公安局及其它科研院所实验室整体搬迁、搬精密仪器设备及安装调试服务公司。
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流式细胞仪作为医院日常诊疗中的诊断辅助工具,在医疗设备搬迁过程中需要特别小心,以确保其搬迁前后的性能不受影响。以下是一套详细的流式细胞仪搬迁调试方案,旨在指导医疗设备搬迁公司能够安全、高效地完成流式细胞仪搬迁调试工作。
流式细胞仪检测的准确度、精密度、荧光与散射光灵敏度、分辨率是影响流式细胞分析的重要因素。流式细胞仪光学、液流和电子系统的元件损坏或未调试到最佳状态均可导致流式细胞分析结果出现偏差甚至错误。为了使流式细胞分析结果准确、可靠,并且在各实验室间具有可比性,搬迁完成后应对仪器进行校准,使仪器达到标准化。在安装完成后,对流式细胞仪进行全面的调试,包括激光强度、液流速度、测量区光路等关键参数的调整。调试过程中,应使用专业的测试设备和工具,确保设备的性能达到最佳状态。
1、光路校正调试
光路校正是最关键的校准,其目的是使样本流处于激光束的中心,样本流与激光束发生相互作用的信号能够被灵敏地检测,信号脉冲有最大的幅度和最小的宽度,而且有良好的重复性。在散射光或荧光直方图中,峰的高度最高、宽度最窄。使用散射光和荧光均匀的颗粒或微球很容易使流式细胞仪的光路达到最佳校正。大多数微球大小的均匀性比典型细胞的变异更小,荧光强度的变异系数较小,一般<2%。光路校正的方法一般是在流式细胞仪开机并通过自检后直接将微球用磷酸盐缓冲液稀释并上机检测。
2、荧光灵敏度校准
流式细胞仪的荧光灵敏度的概念有两个方面的含义:一是仪器能够检测到的最小荧光量,又称为检测极限;二是在混合细胞悬液中能够分辨出未进行荧光染色的细胞和有弱荧光细胞的能力,又称为荧光分辨率。两种仪器可能有相同的检测极限,但分辨荧光染色细胞的能力可有显著差别。当测量荧光染色细胞时,荧光检测极限十分重要,所测定的细胞数量越多,平均荧光强度将越准确和精密。荧光分辨率对免疫荧光分析最为重要,它可影响到测定的精密度和有不同荧光染色强度细胞亚群的区分。检测荧光灵敏度的标准微球可从专业厂商购买。
3、光散射灵敏度校准
光散射灵敏度通常指在无颗粒的液体中检测到最小颗粒的大小。前向散射光的灵敏度通常受激发光源产生的光学噪声的影响,侧向散射光灵敏度常受到鞘液中亚微米级颗粒的限制。目前,一般流式细胞仪的前向散射光灵敏度可达0.2~05H。用相对或绝对光散射强度两种不同的微球可以作为一种方法校正仪器的光散射。目前,大多数实验室均使用与样本生物学特征类似的细胞监测光散射。
4、光电倍增管校准
流式细胞仪在使用过程中,光电倍增管随时间的增加,其放大功率会有所改变,对样品检测的灵敏度会产生影响。为保证样品检测时仪器处于最佳工作状态,采用质控品进行光电倍增管校准,必要时进行电压补偿。
5、绝对计数的校准
为保证仪器在计数时的准确性,仪器应采用绝对计数标准品建立绝对计数标准。该标准品是经标定的,如以计算1000个细胞为1m,作为设定标准。在样本测定时以此为标准进行绝对计数,从而获得绝对计数的标准值。
6、光谱重叠补偿
流式细胞分析中的荧光染色常需要两种或两种以上标记不同荧光色素的单克隆抗体或不同染料的荧光色素进行多色分析。临床实验室可以用经多色荧光染色后的正常淋巴细胞作为参考标准进行补偿校正,根据仪器设置的补偿电路进行自动或手动的补偿,可合理设置荧光信号的补偿值。
医疗设备流式细胞仪搬迁调试是一项复杂而细致的工作,需要专业团队严格遵守设备的操作规范和安全规程。通过遵循上述方案,可以确保流式细胞仪在搬迁过程中不受损坏,并在搬迁后能够迅速恢复工作,为医疗机构提供持续、可靠的检测服务。
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